Video : Mise en culture de bactéries lyophilisées

Windows Media	Quick time	Real player
9.28 Mo	7.19 Mo	5.94 Mo

Matériel nécessaire :
- Bec Bunsen ou hotte à flux laminaire
- Crayon à pointe diamant
- Pipettes Pasteur
- Oëse ou pipette Pasteur boutonnée

Milieux :
- milieu liquide en tube (EPN ou autre bouillon nutritif) de 5 mL
- milieu gélosé en boîte de Pétri (LPGA ou autre gélose nutritive)

Mise en culture des souches lyophilisées :

• Prendre l'ampoule, faire 3 traits de crayon graveur à l'étranglement prévu à cet effet. Désinfecter à l'alcool, sécher à la flamme. Casser l'ampoule.
• Remettre le lyophilisat en suspension en prélevant 300 µl de bouillon dans un tube.
• Bien homogénéiser avec l'étiquette qui peut retenir le lyophilisat.
• Déposer deux gouttes du lyophilisat sur une gélose nutritive et mettre le reste dans le tube de bouillon.
• Conserver une goutte intacte et étaler la seconde en 3 secteurs afin d'obtenir des colonies isolées.
• Mettre à l'étuve boîtes et tubes à la température optimale de croissance de la souche
• En cas d'absence de croissance sur le milieu gélosé, il est possible d'étaler une goutte du bouillon sur un nouveau milieu gélosé

Composition des milieux usuels :